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病菌 PCR 分型診斷方法 第2部分：產(chǎn)氣莢膜梭菌 PCR 分型檢測方法 現(xiàn)行

Method of PCR typing diagnosis for bacterial Part2：Method of PCR typing detection for Clostridium perfringens

標(biāo)準(zhǔn)號：DB21/T 2734.2-2017

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基本信息

標(biāo)準(zhǔn)號：DB21/T 2734.2-2017
發(fā)布時間：2017-02-23
實施時間：2017-03-23
首發(fā)日期：
起草人：趙鳳菊、顧貴波、關(guān)淼、楊本勇、于長泳、李井春、馬建山、魏園園、梁喬、張雷、鄭付華、王欣、鄧文超、王竹
標(biāo)準(zhǔn)分類： 動物檢疫、獸醫(yī)與疫病防治
ICS分類：獸醫(yī)學(xué)
提出單位：遼寧省動物疫病預(yù)防控制中心
起草單位：遼寧省動物疫病預(yù)防控制中心、遼寧省動物醫(yī)學(xué)研究院
歸口單位：遼寧省畜牧獸醫(yī)局
發(fā)布部門：遼寧省質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局
主管部門：遼寧省畜牧獸醫(yī)局

標(biāo)準(zhǔn)簡介

本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了產(chǎn)氣莢膜梭菌A、B、C、D、E 五型PCR檢測方法的技術(shù)要求。 本標(biāo)準(zhǔn)適用于產(chǎn)氣莢膜梭菌病的診斷、監(jiān)測及流行病學(xué)調(diào)查，適用于動物糞便、腸內(nèi)容物及純培養(yǎng)物中產(chǎn)氣莢膜梭菌α-毒素、β-毒素、ε-毒素和ι-毒素基因的PCR檢測。 本標(biāo)準(zhǔn)中的試驗操作應(yīng)在生物安全Ⅱ級（BSL-2）以上的實驗室進行。

標(biāo)準(zhǔn)摘要

標(biāo)準(zhǔn)《病菌 PCR 分型診斷方法》按照 GB/T 1.1-2009 給出的規(guī)則起草。
標(biāo)準(zhǔn)《病菌 PCR 分型診斷方法》分為兩個部分：
——第 1 部分：大腸桿菌 PCR 檢測方法；
——第 2 部分：產(chǎn)氣莢膜梭菌 PCR 分型檢測方法。
本部分為病菌 PCR 分型診斷方法的第 2 部分。
本分由遼寧省動物疫病預(yù)防控制中心提出。
本標(biāo)準(zhǔn)由遼寧省畜牧獸醫(yī)局歸口。
本標(biāo)準(zhǔn)起草單位：遼寧省動物疫病預(yù)防控制中心、遼寧省動物醫(yī)學(xué)研究院。
本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人：趙鳳菊、顧貴波、關(guān)淼、楊本勇、于長泳、李井春、馬建山、魏園園、梁喬、張雷、鄭付華、王欣、鄧文超、王竹。

標(biāo)準(zhǔn)目錄

前言II
1范圍1
2規(guī)范性引用文件1
3縮略語1
4原理1
5儀器和器材1
6試劑和引物1
61試劑2
62引物2
7操作步驟2
71樣品的采集、前處理、存放與運輸2
711采樣注意事項2
712采樣工具2
713腸內(nèi)容物的采集與前處理2
714糞便的采集與前處理3
715產(chǎn)氣莢膜梭菌純培養(yǎng)物3
716存放與運送3
72PCR檢測3
721DNA提取3
722PCR3
7222電泳PCR反應(yīng)條件4
7223電泳4
8試驗成立的條件4
9結(jié)果判定4
附錄A（規(guī)范性附錄）試劑配制5
A1電泳緩沖液（50倍）5
A1105mol/L乙二銨四乙酸二鈉（EDTA）溶液（Ph80）5
A12TAE(三羥甲基氨基甲烷一乙酸)電泳緩沖液(50倍)5
A21%瓊脂糖凝膠5

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